بیماریهای قابل انتقال بین انسان و حیوان (زئونوزها) (۹)

مقدمه:

اساساً بروسلوز بیماری زئونوتیک ناشی از اعضای جنس بروسلا بوده که مشتمل بر شش‌گونه شناخته شده براساس پاتوژنی سیتی و میزبان‌های ترجیحی: بروسلا آبورتوس (گاو)، بروسلا ملی تنسیس (گوسفند وبز)، بروسلا سوئیس (خوک)، بروسلا کنیس (سگ)، بروسلا اوویس (قوچ) و بروسلا نئوتومه (رات صحرایی)،  وهمچنین سویه‌های اخیر جدا شده ازپستانداران دریایی می‌باشد.

بررسی‌های اولیه هیبریدیزاسیون ‌DNA-DNA میزان بالای تجانس‌(هومولوگی) دربین گونه‌های بروسلا را نشان‌داده و ازاین رو جنس بروسلا به‌عنوان گونه‌یی واحد بروسلا ملی تنسیس با چندین بایووار پیشنهاد گردید. این یافته‌ با چندین بررسی مولکولی، ازجـــمـلـــــه تـــــرادف ژن 16s rRNA ، الکتروفورز چند جایگاهی آنزیمی، و بررسی ژنوم کامل مورد تأیید قرار گرفت. با وجود این، به علت فقدان حمایت وسیع ازاین پیشنهاد، اخیراً زیر کمیته طبقه‌بندی بروسلا به طبقه‌بندی قراردادی پیشین شش‌گونه بروسلا با بایووارهای شناخته شده همراه با دو گونه بروسلا ازپستانداران دریایی، بروسلا ستاسه‌آ (ستی) و بروسلا پینی پدیالیس تأکید ورزیده است. (درزمان بررسی اولیه سویه BO1 درسال 2007 هنوز بروسلا میکروتی شناخته نشده بود). بروسلا‌ها پاتوژن‌های داخل سلولی اختیاری بوده که بسیاری‌از اعضاء و بافت‌های نرم، ازجمله غدد پستان را آلوده ساخته وغالباً به سقط جنین، کاهش تولید شیر و مرگ جنین درحیوانات منجر می‌شود.

اکثر موارد بیماری انسان درنتیجه بروسلا آبورتوس، بروسلا ملی تنسیس، بروسلا سوئیس و بروسلاکنیس ایجاد‌شده و غالباً با مصرف فرآورده‌های لبنی غیرپاستوریزه یا تماس مستقیم با حیوانات آلوده یا تولیدات آنها مرتبط می‌باشد. همچنین بروسلوز به‌عنوان بیماری ناشی‌از مخاطره‌ی شغلی در آزمایشگاه ازطریق استنشاق افشانه‌ها (آئروسل‌ها) شناخته شده‌است. در انسان، بروسلوز یک بیماری عمومی تب‌دار بوده و ممکن‌است باعفونت مزمن ناتوان‌کننده‌ی سیستم‌ها و اعضای اصلی چون استخوان، کلیه، مغز، اپیدیدیم، کبد، تخمدان و کیسه‌ی‌صفرا مرتبط باشد. با‌وجود‌این، ارتباط بروسلا با عفونت غدد‌پستان، ازجمله پروتزها، پدیده‌ی نادری در انسان بوده است. سه مورد بروسلوز انسان ناشی‌از بروسلا ملی‌تنسیس دربیماران پستان پیوندی گزارش شده‌است. این بیماران ازطریق مصرف پنیر غیرپاستوریزه یا استشمام کشت‌های بروسلا ملی‌تنسیس درآزمایشگاه بالینی به عفونت دچار شده بودند.

دراین بررسی جداسازی و شناسایی سویه‌ جدید بروسلا از زخم پیوند پستان خانمی 71 ساله از اورگون با نشانی‌های منطبق با بروسلوز گزارش شده‌است.

مواد و روش:

گزارش موردی ـ دراوایل ژوئن سال 2005، خانم بیمار 71 ساله با تب، کاهش فشارخون، لوکوسیتوز، و التهاب اطراف پیوند پستان راست دربیمارستان بستری شد. در ابتدا بیمار با سفالکسین به طور ناموفق، و بعد سفازولین تا اواخر ژوئن تحت‌درمان قرارگرفت. بیمار برداشت موفقیت‌آمیز هردو پیوند پستان را دراوایل جولای 2005 ازسرگذراند. نمونه‌هایی خون و مایع زخم پیوند پستان دربیمارستان محلی مورد بررسی قرار گرفت.

ابتدا بیمارپیوندهای سیلیکون را در اوایل دهه‌ی 1970 دریافت داشته بود. درسال 1999یا 2000، بیمار پیوندهای سیلیکون را خارج ساخته و آنها را با پیوندهای سالین دریک بیمارستان محلی جانشین کرده بود. بیمار به کاهش سطح هوشیاری همراه با خواب آلودگی(لتارژی) و دردهای عضلانی (میالژی) دراواخر ژانویه و اوایل فوریه 2005 دچار شد. دو ماه بعد ازآن، بیمار به تب بالاتر از 103درجه فارنهایت مبتلا شده،که شخصاً خود را با استامینوفن تحت درمان قرارداد. دیگر اعضای خانواده نیز نشانی‌های مشابهی را گزارش نمودند. دراواخر ماه می و اوایل ژوئن، بار دیگر تب104 درجه فارنهایت را بیمار گزارش نموده و التهاب پستان راست وی مورد توجه قرارگرفت. بیمار فاکتورهای مخاطره آمیز بروسلوز را نفی نموده، هرچند که به ایرلند برای مدت چند هفته درجولای سال 2004 سفرکرده بود. تا اواخر ژانویه یا اوایل فوریه 2005، بیمار دو سگ کاملاً سالم داشته و هیچ‌گونه تماسی با سگ‌های دیگر یا گاو نداشته است. بیمار یک خرگوش داشته که 6 ماه پیش‌از بیماری وی به علت ناشناخته‌یی مرده بود. نامبرده اغلب از نمایشگاه‌های اسب درخلال سال پیش بازدید کرده بود. بیمار طی 39 سال گذشته درناحیه پورتلند اورگون (ایالات متحده آمریکا) زندگی می‌کرد.

از مایع زخم پیوند‌پستان راست بیمار درکشت روی محیط آگار شوکولاتی باکتری کوکوباسیل گرم منفی جدا گردید. ابتدا باکتری برطبق روشهای استاندارد میکروبیولوژی مورد بررسی قرارگرفته و به‌عنوان گونه‌یی از بروسلا شناسایی شد. کشت باکتری جهت شناسایی تأییدی به مرکز کنترل و پیشگیری بیماریها (CDC) درآتلانتا، جورجیا، ارسال گردید. این سویه به‌عنوان BO1 نامیده شد و با خون دفیبرینه خرگوش در 70ـ‌ درجه‌ سانتی‌گراد تا آزمایش‌های تکمیلی بعدی نگهداری شد. با سویه‌های رفرانس بروسلا مورد مقایسه قرارگرفته است. الگوی CFA سلول کامل سویه BO1 با الگوی بروسلا آبورتوس، بروسلا ملی تنسیس، بروسلا ملی تنسیس، بروسلا نئــوتـــومه، بروسلا اوویس و بروسلا سوئیس مشابه بوده و بـا مقادیر اصلـی (۵ تا ۴۶ درصد) C19:0 cyc 11-12, C18:1w7c،C18:0 و C16:0 و مقادیر کمتر (1 تا 4 درصد) Br-C19:1 مشخص می‌گردند.

مشخصات مولکولی:

ویژگی‌های استاندارد میکروبیولوژی، ازجمله الگوهای حساسیت به داروهای ضد‌میکربی و اسیدهای چرب سلولی(CFA)، برجانشینی سویه BO1 به‌عنوان عضوی ازگونه بروسلا دلالت داشته، اما شناسایی معتبرگونه تعیین نگردید. ازاین‌رو، بررسی‌های مولکولی ترادف ژن 16s rRNA جهت تأیید به‌عنوان گونه‌یی از بروسلا صورت پذیرفته است. ژن 16sRNA از DNA ژنومی BO1 درمقایسه با گونه‌های شناخته شده بروسلا و تیپ سویه آکروباکتروم اینترمدیوم مورد بررسی قرارگرفته است. درآنالیز نهایی 5 اختلاف پایه‌یی درموقعیت‌های 167تا170 و 234 بین BO1 وگونه‌های بروسلا، با نتیجه ‌99/6٪ همانندی نشان داده‌شد. مقایسه ژن 16srRNA سویهBO1 و آکروباکتروم اینترمدیوم 14 اختلاف پایه‌یی، با همانندی 99٪ را به‌دست داده است. نهایتاً، بر‌اساس یافته‌های ژن 16srRNA گوسفند (SBA) یا خرگوش(RBA) رشد داده شده و برای تجزیه‌ی سلولی DNA مورد استفاده قرارگرفت. با استفاده از پرایمرهای اوباکتریالF8 و R1492 تجزیه‌ی سلولی DNA جهت تعیین ترادف ژن 16srRNA به‌کارگرفته شد. آنالیز کامپیوتری ژن با استفاده از روش MEGA3.1 صورت پذیرفت.

DNA ژنومی با استفاده از رشد 2 روزه در 37 درجه سانتی‌گراد سویه BO1 درمحیط SBA با استفاده از روش استخراج سدیم دودسیل سولفات ـ فنل آماده گردید.

DNA ژنومی تخلیص‌شده BO1 جهت هیبریدیزاسیون DNA- DNA با DNA بروسلا ملی‌تنسیس 16M و بروسلا سوئیس1330مورد استفاده قرارگرفت. آشکارسازی IS711 اختصاصی بروسلا 842bp)DNA) بروسلا ملی‌تنسیس 16M، بروسلا اوویس (ATCC25840) و سه BO1 به‌کارگرفته شد. شناسایی جایگاه ژنتیکی 9‌ژن مستقل جهت تعیین رابطه BO1 با گونه‌های کلاسیک بروسلا در آنالیزی MLSA انجام پذیرفت. بررسی‌های مقایسه‌یی با 160‌سویه مختلف بروسلا و 5‌گونه‌آکروباکتروم (آکروباکتروم تـری‌تـی‌سـی [O.triticii [LMG18957T ، آکروباکتروم اینترمـدیوم [LMG3301T]، آکروباکتروم گالی‌نی‌فسـیس[O.gallinifaec is [DSMI5295T، آکروباکتروم آنتروپی[LMG3331T] و آکروباکتروم گریکنوننس[O.grignonense [LMCI8954T انجام پذیرفت. رابطه BO1 با تیپ سـویه هـرگونه بروسلا و گــونه‌های آکروباکتــروم جهت هریک از 8 قطـعه‌ی ژنتیکی نامتجانــس نیز سنجیـده شده‌اسـت.