بیماریهای قابل انتقال بین انسان و حیوان (زئونوزها) (۸)

مشخصات فتوتیپی ـ سویه 02/611 کوکوباسیل گرم منفی و غیرمتحرک بوده، به‌طور هوازی رشد کرده، اکسیداز، کاتالاز و اوره آز مثبت (ویژگی‌های مشخص جنس بروسلا) است. متابولیسم سریع اوره بروسلا سوئیس را پیشنهاد داشته و با نتایج Lـ آرژیـنین دی‌هیدرولاز، Lـ لیزین‌دکربوکسی‌لاز، DLـ اورنی‌تین‌دکربوکسی‌لاز و رشد در I ـ اریتریتول، سویه باکتری به‌عنوان بروسلا سوئیس شناسایی شده، هرچند که از‌نظر رشد مثبت آن در رقت 1/25000 محیط رنگی فوشین بازیک غیرتیپیک بوده است. به‌منظور تأیید تشخیص سویه‌باکتری به باکتری به چهار آزمایشگاه رفرانس ارسال گردید.

آزمایشگاه رفرانس A سویه جدا شده را بایووار3 بروسلا سوئیس و آزمایشگاه‌هایB وC آن را بایووار یک بروسلا ملی‌تنسیس شناسایی نمودند.

مشخصات مولکولی‌ـ در بررسی اولیه وابستگی سویه به‌گونه‌های بروسلا در ارتباط با بروسلا سوئیس (398/403)، بروسلاملی تنسیس (398/403)، بروسلا آبورتوس (398/403)، بروسلانئوتومه (398/403)، بروسلا اوویس (397/403) و بروسلاکینس (396/404) نشان داده شد. آزمایشگاه رفرانسD با استفاده از آزمایش‌های مولکولی سویه‌باکتری‌ را بایووار 5 بروسلا سوئیس گزارش نمود.

PCR به کارگرفته شده برای omp25 قطعه 700bp DNA تمامی گونه‌های بروسلا را تقویت نموده و سویه 02/611 الگوی P1 را تولید نمود.

به‌همان طریق bp26 PCR قطعه 1.900 bp- سویه‌های بروسلا پستانداران دریایی، ازجمله پینی‌پدها و سه‌تاسه‌آ و قطعه کوچکتر 1.029bp سویه‌های بروسلا حیوانات خاک‌زی را تقویت نمود. قطعه سویه 02/611 ازنظر اندازه منطبق با سویه‌های پستانداران دریایی بروسلا بوده است. omp31/PCR نیز 900bp از تمامی گونه‌های بروسلا، ازجمله سویه 02/611 و به استثنای بروسلا آبورتوس را تولید نمود. محصول 1.230bp از تقویت ژن‌های omp2a و omp2b تمامی گونه‌های بروسلا تولید گردید. الگوهای omp2a RFLP تولید شده به‌وسیله‌ی سویه انسانی 02/611 با الگوهای RFLP سویه F5/99 از منشاء دولفین پوزه‌دراز و سویه UK1/03 بامنشاء خوک آبی معمولی منطبق بوده‌است. الگوهای توأم omp2a و omp2b سویه 611/02 نیز هماننند سویه F5/99 تعیین گردید. ژن‌های omp2a و omp2b سویه 02/611 به‌میزان100٪ همانند سویه دریایی F5/99 بوده است. همچنین ژن omp2a سویه 02/611 به نسبت 100٪ با ژن omp2a سویه‌های خوک آبی معمولی (AF003819 و DQ59380 بانک ژن) همسان بوده اما ژن‌های omp2b دو سویه منطبق نبوده‌اند. آنالیز فیلوژنتیک نیز همانندی هر‌دو باکتری بروسلا سویه‌های02/611 وF5/99 و وابستگی نزدیک آنها با سویه‌های جداشده از خوک‌آبی نشان داد. مشخصات مولکولیIS711RFLP سویه02/611 در الگوی مشابهی با سویه F5/99 دولفین پوزه دراز ایالات‌متحده می‌باشد. هر ژنوم حاوی 25 نسخه IS711 با اندازه بین 20.000bp-1.520 بوده‌اند. الگوی مشابهی برای بروسلا جداشده از پستانداران دریایی توصیف شده‌است.

بررسی 5 ژن اصلی و omp25 نزدیکترین وابستگی سویه‌های پستانداران دریایی با بروسلا سوئیس را نشان داد. سویه‌ 02/611 با حداقل اختلاف چهار باز با هریک از بایووارهای بروسلا سوئیس متفاوت است. از‌بین 5 ژنوتایپ متمایز پستانداران دریایی شناخته شده تاکنون، سویه 02/611 ازچهار مورد در 2‌تا4 نوکلئوئید تفاوت داشته اما کاملاً با F5/99 (دولفین پوزه‌دراز ایالات‌متحده) منطبق می‌باشد. به‌رغم بررسی حدود 50 سویه پستانداران دریایی، این ژنوتایپ تنها دراین سویه واحد پیش‌تر مشاهده شده است.

PCR اختصاصی برای بروسلا پینی پدیه قطعه  300-bp سویه‌های UK1/03,02/611(خوک‌آبی معمولی) وF5/99 (دولفین پوزه‌دراز ایالات‌متحده) را تقویت نمود. PCR اختصاصی‌III و‌IV برای بروسلا ستاسه (ستی) قطعات DNA سویه‌هایF5/99,02/611، یا UK1/03 را تقویت ننمود. بااستـفاده از PCR III  قـــطعه 400-bp سویه UK9/02 (خوک‌وال) و با به‌کارگیری‌PCR IV قطعه  300 bp- سویه UK59/94 (دولفین گورخری) تقویت شد.

ارزیابی مجدد فنوتیپی‌ـ به‌دنبال شناسایی و نتایج بررسی‌های مولکولی، ارزیابی مجدد الگوی فنوتیپی سویه 611/02 با تکرار آزمایش L‌ ـ‌ ‌آرژنیین دی‌هیدرولاز، Lـ‌ لیزین دکربوکسی‌لاز و DL ـ اومی‌تین‌دکربوکسی‌لاز نشان‌داد که این سویه ازنظر فنوتیپی منطبق با نتایج سویه‌های بروسلا پستانداران دریایی گزارش‌شده پیشین می‌باشد. علاوه برآن، سویه 02/611 نتایج فتوتیپی همانند سویه بروسلا جدا شده‌از دولفین پوزه دراز ایالات‌متحده (F5/99) را نشان می‌دهد.

بحث:

بررسی حاضر دومین گزارش از بروسلوز اکتسابی طبیعی انسان با منشاء سویه پستاندار دریایی بروسلا اولین مورد مرد بیمار مبتلا به بروسلوز نخاعی ناشی‌از سویه دریایی می‌باشد. گزارش پیش‌تر دو مرد مبتلا به عفونت اکتسابی طبیعی باگونه‌های بروسلا دریایی به‌صورت بروسلوز عصبی (نوروبروسلوز) را توصیف نموده است. سویه‌های پستانداران دریایی بروسلا به‌عنوان عامل بیماری با طیف وسیعی ازنشانیهای بالینی و شدت متفاوت در پینی‌پدها و سه‌تا‌سه‌آ با دامنه‌یی ازکاریرهای غیرعلائمی تا اورکیت، سقط جنین، و مننگوآنسفالیت گزارش شده‌اند. به‌طور مشابه، شواهدی از بروسلوز با نشانی‌های خفیف در انسان وجود داشته و از این رو بیماری‌ ممکن‌است تشخیص داده نشده یا به غلط تشخیص داده شود. دراین گزارش بیمار علائمی و سرولوژی مثبت بوده چون آزمایش درخلال فاز اولیه عفونت صورت پذیرفت.

با‌وجود این، درگزارش پیشین تنها یکی‌از بیماران تیتر مثبت بروسلا داشته، هر دو بیمار تاریخچه‌ی‌ طولانی‌تری از نشانی‌ها را در زمان آزمایش داشتند.

بیماری زئونوتیک بیماری ناشی‌از بروسلا در ارتباط با گونه‌های بروسلا ملی‌تنسیس، بروسلا آبورتوس، بروسلا‌سوئیس و بروسلاکینس متداول می‌باشد. عفونت‌ناشی ازسویه‌‌های پستانداران دریایی بروسلا درانسان به ندرت گزارش شده و با‌توجه به مخاطره بالای مواجهه با خوک‌ها درخلال دوره‌ی کمون بیماری، تعجب‌آور نیست که تفسیر اولیه نتایج فنوتیپی به شناسایی مقدماتی بروسلا سوئیس منجر شد. بعد ازکسب نتایج آزمایش‌های مولکولی، بررسی مجدد نتایج فنوتیپی انطباق سویه جدا‌شده با سویه پستانداران دریایی بروسلا نشان داده شد. درسال2001 طبقه‌بندی سویه‌های دریایی بروسلا به‌عنوان بروسلا‌پینی‌ پدیه و بروسلا ستاسه‌ئه در سطح گونه با منشاء به‌ترتیب از پینی‌پدها و سه‌تا سه‌آ پیشنهاد شده. (بعداً تغییر کوچکی دراین پیشنهاد ایجاد شده و دو‌گونه به‌طور رسمی تحت‌عناوین بروسلا پینی‌پدیالیس و بروسلا ستی نامگذاری شدند). عموماً این دوگونه براساس وابستگی به گاز CO2 (بروسلا پینی‌پد پالیس) و متابولیسمD ـ گالاکتوز (بروسلاستی) اختلاف دارند. سویه انسانی در‌این گزارش نزدیکترین شباهت را با سویه دولفین پوزه‌ دراز ایالات متحده داشته و هردو سویه براساس نتایج فتوتیپی به‌عنوان بروسلاستی طبقه‌بندی می‌شوند. نتایج آزمایش فنوتیپی با نتایج آزمایش PCR اختصاصی و ساختار ژن omp2a هماهنگ نبوده چون نتایج هر‌دو آزمایش ژنوتیپی رابطه‌ی بسیار نزدیکتر سویه‌های انسانی و دولفین پوزه‌دراز ایالات‌متحده را با بروسلاپینی پدیالیس تا بروسلاستی نشان داد. علاوه برآن، تغییر درنتایج حاصله از آزمایش مجدد بیوشیمیایی نشان‌داده شناسایی در‌سطح گونه با استفاده از تنها ویژگی‌های فنوتیپی ممکن‌است معتبر نباشد.

همانندی سویه ‌انسانی02/611 با سویه‌دولفین پوزه‌دراز ایالات متحده (F5/99) درآزمایش‌های پیشرفته‌تر مولکولی مورد تأیید قرارگرفته که قبلاً ذکر شده است.

تاکنون ژنوتایپ F5/99 - 02/611 گزارش نشده و انتشار و شیوع طبیعی سویه نامشخص است. هر‌دو سویه انسانی و دولفین پوزه‌دراز نزدیکترین وابستگی‌را با بروسلاپینی‌پدیالیس دارند. سویه‌های بروسلا دو بیمارپرویی با سویه جدا شده از خوک آبی معمولی همسان بوده‌اند. منشاء عفونت بروسلایی بیماران پرویی شناخته نشده و منشاء عفونت بیمار نیوزیلندی تحت بررسی است.

در فقدان شواهد تماس با پستانداران دریایی، بررسی منشاء عفونت به دیگر مسیرهای احتمال انتقال متمرکز شده‌است. بروسلاها در ارتباط با بیماریزایی (پاتوژنیسیتی) و میزبان ترجیحی نامگذاری شده‌اند، اما احتمال عبور از سدگونه‌یی وجود دارد. در بررسی‌های تجربی گاو وگوسفند با بروسلاهای پستانداران دریایی آلوده شده‌اند. یک سویه از خوک‌آبی اقیانوس پاسیفیک (آرام) سقط‌جنین دریک سـوم گاوهای آلـوده را مــوجب گردید.

در گاوهای سرم مثبت بدون سقط‌جنین، بروسلا ازطیف وسیعی از بافت‌ها جدا نشده که برعفونت‌گذرا و ناپایدار اشاره داشته است. تشخیص بر‌اساس تغییرات هیستوپاتولوژی، جداسازی بروسلا از گاوهای دچار سقط‌جنین و واکنش‌ سرولوژی‌100٪ قرارداشته است.گوسفندان تلقیح شده با سویه‌یی از خوک آبی تنها سطوح پایین آنتی بادی را نشان داده که همچنین ناپایدار و زودگذر بوده است. سویه بروسلا ازیک مورد از 16‌میش دچار سقط‌جنین و جنین آن جدا گردید. به‌طور مشابه، توله خوک‌های آلوده با سویه 02/611 سطوح پایین و ناپایدار آنتی‌بادی را در 3‌مورد از 10‌ توله‌خوک (با 7‌مورد بدون واکنش سرمی) تولید نمود (J.Bingham ـ یافته‌های منتشر نشده). باکتری از غدد‌لنفاوی حلقی ـ حنجره‌یی و آرواره‌یی‌3‌ توله‌خوک کشتار شده جدا گردید. در بررسی مقدماتی، خوک به‌عنوان منشاء احتمالی عفونت، براساس شناسایی احتمالی اولیه به‌عنوان بروسلا سوئیس، درنظر گرفته‌شده وتماس بیمار با خوک در زمان عفونت مورد توجه قرارگرفت. هیچگونه شواهد سرولوژی درخوک‌های گله مشاهده نشد. با‌وجود این، احتمالاً پاسخ آنتی‌بادی ناپایدار در سطوح پایین مورد شناسایی قرارنگرفته بود. آزمایش بیشتر خوک‌ها ازنظر بروسلا انجام پذیرفت. غددلنفاوی حلقی ـ حنجره‌یی، تحت فکی، معدی ـ کبدی، ایلیاک داخلی و کشاله‌ی رانی 74 خوک از 22مرکز پرورش در یک کشتارگاه جمع‌آوری‌ شــده و به‌روش omp25 PCR ازنظر گونه‌ی بروسلا مورد بررسی قرارگرفت. تمامی آزمایش‌ها منفی بودند. بیمار نیوزیلندی ازماهیان خام مصرف کرده بود. دوبیمار پرویی پنیر غیر‌پاستوریزه و صدف‌خام مصرف نموده و وتصور شد که منشاء عفونت آنها با بروسلا ممکن‌است به عامل دیگری به غیر‌از پستانداران دریایی مرتبط بوده باشد.

خلاصه:

عفونت طبیعی اکتسابی انسان با سویه‌ی پستاندار دریایی بروسلا تنها یک‌بار پیش‌تر در دو بیمار از پرو گزارش شده‌است. دراین بررسی جداسازی و شناسایی سویه‌یی بروسلا از بیمار نیوزیلندی با نزدیکترین وابستگی‌ به سویه‌های قبلی شناسایی شده از پستانداران دریایی گزارش می‌شود. در آزمایش‌های باکتریولوژی متداول مقدماتی سویه جداشده به‌عنوان بروسلا سوئیس شناسایی شد. باوجود ‌این نتایج حاصله، دقیق‌نبوده و باکتری جدا‌شده به چهار آزمایشگاه رفرانس بین‌المللی جهت بررسی‌های بیشتر ارسال گردید. در آزمایشگاه‌های رفرانس نیز ازطریق روش‌های متداول باکتریولوژی و آزمایش مولکولی در آزمایشگاه چهارم سویه موردنظر به‌عنوان بروسلا سوئیس یا بروسلا ملی‌تنسیس شناسایی گردید. بررسی‌های بیشتر مولکولی به‌وسیله‌ی روش‌های PCR ، PCR ـ پلی‌مورفیسم طول قطعه‌ محدود (PCR-RFLP) و بررسی DNA ژن IS711;bP26، ژن‌های omp شامل omp31, omp25,omp2 و IRS-PCR,omp2b قطعات III,I و IV و قطعات منتج ژن اصلی انجام شده تا مشکل شناسایی را برطرف سازد. نهایتاً سویه جدا شده به‌عنوان گونه‌یی ازبروسلا با وابستگی بسیار نزدیک به سویه جدا شده از دولفین پوزه دراز (Tursiops trun catus  ـ تورسیوپس ترونکاتوس) و خوک‌آبی معمولی (Phoca vitulina ـ فوکاویتولینا) در ایالات متحده‌ی آمریکا شناسایی گردید.

منابع در دفتر نشریه می‌باشد.